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晶抗生物實驗中細胞樣本的收集和處理方法
更新時間:2023-09-01   點擊次數:542次

細胞上清:需保證各組間培養細胞的數量基本一致,細胞生長狀態良好。建議采用6孔板培養細胞,并保證細胞數量達到106左右,即細胞密度達70%-80%左右,即可收集培養液,于2-8℃、1000×g離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片,取上清檢測。

細胞裂解液:貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗,1000×g離心5分鐘后收集細胞;懸浮細胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每106個細胞中加入150-200μL PBS重懸(推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑;若含量很低,可減少PBS的體積),并通過反復凍融或超聲,使細胞破碎。將提取液于2-8℃、1500×g離心10分鐘,取上清檢測。

反復凍融:-80℃放置1h/液氮放置0.5h,然后置于30℃水浴鍋中,輕微振蕩,使其迅速融化,此操作反復2-3次即可。


超聲方法:用超聲波發生器,以振幅14μm超聲處理30 s,在冰水浴條件下,破碎細胞;或者使用超聲波破碎儀,200 W,2 s/次,間隙3 s,總時間5 min。

樣本中建議提前加入蛋白酶抑制劑,常規推薦PMSF:工作濃度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。

細胞培養過程中,有許多條件需要摸索,包括細胞類型、培養基組分、細胞數量、生產狀態、干預條件和物質等。前期基礎打得牢固,對后續ELISA或其他種類實驗的開展,及結果的分析,具有更多的參考意義。


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